TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立

中国媒介生物学及控制杂志 ›› 2012, Vol. 23 ›› Issue (2): 108-110.

TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立

付秀萍, 贺金荣, 张景山, 王景泉

中国疾病预防控制中心传染病预防控制所人兽共患病室, 北京102206

收稿日期:2011-10-08 出版日期:2012-04-20 发布日期:2012-04-20
作者简介:付秀萍(1977-),女,硕士,助理研究员,从事立克次体疾病预防与控制研究。Email: fuxiuping313@sina.com
基金资助:
国家重点基础研究发展计划(973计划)资助(2010CB530200)

Establishment of Real-time PCR assays for detection of Orientia tsutsugamushi 56 kD gene with a TaqMan-MGB probe

FU Xiu-ping, HE Jin-rong, ZHANG Jing-shan, WANG Jing-quan

National Institute for Communicable Disease Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China

Received:2011-10-08 Online:2012-04-20 Published:2012-04-20
Supported by:
Supported by the National Basic Research Program of China(973 Program)(No. 2010CB530200)

摘要/Abstract

摘要：

目的建立敏感、特异、定量Real-time PCR方法,用于恙虫病东方体的检测。方法根据恙虫病东方体56 kD外膜蛋白基因序列设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的TaqMan-MGB探针具有良好的特异性,建立的荧光定量PCR标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.99),灵敏性评估发现每个20 μlPCR反应管中只要有26个拷贝的目的基因即可被检测到,即最低检出浓度为2拷贝/μl,并且具有较好的重复性。结论建立的荧光定量PCR方法具有很高的特异性和敏感性,可用于恙虫病东方体感染的快速检测。

关键词: 恙虫病东方体, 实时荧光定量PCR, TaqMan-MGB探针

Abstract:

Objective To develop a highly specific and sensitive Real-time PCR assay to detect Orientia tsutsugamushi. Methods A pair of primers and a TaqMan-MGB probe were designed according to the 56 kD outer membrane gene sequence. Results A linear relationship between the threshold cycle (Ct) of the quantitative Real-time PCR and the DNA copy number was demonstrated (r=0.99). The standard curve showed that 26 copies target genes per reaction could be detected by this method. The lowest detection limit of this method was 2 copies per μl. The method showed high species specificity and good reproducibility. Conclusion These results suggested that the Real-time PCR with TaqMan-MGB assay is highly specific and sensitive for the detection of O. tsutsugamushi, which might be applied for the diagnosis of this infection.

Key words: Orientia tsutsugamushi, Real-time PCR, TaqMan-MGB probe

中图分类号:

R513.2

付秀萍, 贺金荣, 张景山, 王景泉. TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测恙虫病东方体方法的建立[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2012, 23(2): 108-110.

FU Xiu-ping, HE Jin-rong, ZHANG Jing-shan, WANG Jing-quan. Establishment of Real-time PCR assays for detection of Orientia tsutsugamushi 56 kD gene with a TaqMan-MGB probe[J]. Chines Journal of Vector Biology and Control, 2012, 23(2): 108-110.

[1]	母群征, 李欣颖, 刘蓉蓉, 杨军, 栗冬梅, 鲁亮, 李贵昌, 侯咏, 李明, 宋秀平, 孟凤霞, 刘起勇. 黑龙江省黑河市部分地区啮齿动物体表寄生恙螨调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2021, 32(5): 570-575.
[2]	赵嘉欣, 王玉姣, 李永香, 母群征, 夏青, 宋秀平, 栗冬梅, 鲁亮, 李贵昌. 小型兽类不同器官恙虫病东方体阳性率调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2021, 32(4): 428-431.
[3]	李贵昌, 王玉姣, 母群征, 夏青, 栗冬梅, 岳玉娟, 鲁亮, 赵宁, 李文, 宋秀平, 王君, 吴海霞, 李兴洲, 刘起勇. 北京市平谷区恙虫病自然疫源地宿主、媒介和病原体调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2021, 32(3): 291-297.
[4]	胡挺松, 李应, 胡秋凌, 吴学林, 高丽芬, 李国伟, 王志勇, 胡海梅, 王意银, 张海林, 张富强. 云南省楚雄州恙虫病流行特征及其病原体东方体基因分型研究[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2020, 31(3): 282-288.
[5]	李贵昌, 李永香, 陈传伟, 刘吉起, 罗运动, 周团结, 沈阳, 蒋之礼, 郭玉红, 宋秀平, 王君, 王玉姣, 赵宁, 栗冬梅, 刘京利, 鲁亮, 刘起勇. 河南省永城市恙虫病自然疫源地调查研究[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(3): 255-258.
[6]	栗冬梅, 梁艳林, 宋秀平, 朱彩英, 康央. Chelex 100树脂快速提取动物组织基因组DNA方法的评估[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(3): 286-291.
[7]	栗冬梅, 徐兆楠, 朱彩英, 张政, 康央, 张洪江, 宋秀平, 唐承军, 葛军旗. 应用TaqMan探针实时荧光定量PCR法调查北京市部分城郊区鼠传病原体流行状况[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(1): 12-17.
[8]	何恺, 黄东升, 安丽, 张腾, 赵丽娟, 李庆芳. 云南省保山市2006－2016年恙虫病流行特征分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(1): 87-90.
[9]	李博, 岳锡宏, 卢珊, 雒涛, 王信惠, 黎唯. 新疆乌苏市古尔图地区长尾黄鼠感染巴尔通体情况调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2018, 29(6): 567-570.
[10]	李贵昌, 李欣颖, 刘晶, 刘海军, 刘京利, 栗冬梅, 鲁亮, 史强, 付秀萍, 刘起勇. 黑龙江省庆安县小兽体表恙螨及恙虫病东方体感染调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(1): 1-3.
[11]	吕燕宁, 李良辰, 窦相峰, 陈丽娟, 张秀春, 关增智, 孙玉兰, 黎新宇, 王全意. 2013年北京地区小兽中3种病原携带状况调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(4): 336-340.
[12]	杨培培, 李文娟, 程鹏, 郭秀霞, 王海防, 王怀位, 张崇星, 寇景轩, 刘丽娟, 公茂庆. 山东省南水北调沿线蚊类密度及流行性乙型脑炎病毒自然感染状况研究[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(3): 232-234.
[13]	曹玉玺, 赫晓霞, 付士红, 李浩, 梁国栋, 王环宇. 巴泰病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(1): 1-4.
[14]	廖虹瑜, 蒋德勇, 母永贵, 杨小蓉. 巢式PCR及序列分析用于攀枝花市恙虫病东方体检测[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(1): 38-41.
[15]	梁克峰, 刘渠, 王德全, 周健明, 金玉娟, 陈应坚, 李静媚, 甘莉萍, 杨慧. 实时荧光PCR检测Nam Dinh病毒方法的建立及初步应用[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2015, 26(5): 447-450.