自制汉坦病毒N蛋白IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒的初步评价

中国媒介生物学及控制杂志 ›› 2010, Vol. 21 ›› Issue (2): 128-130.

自制汉坦病毒N蛋白IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒的初步评价

姚苹苹1，朱函坪1，姚晨辉2，徐芳1，梅玲玲1，张政1，朱智勇1，邓小昭3，张云3

1 浙江省疾病预防控制中心肾综合征出血热重点实验室（杭州310051）； 2 大连医科大学； 3 南京军区军事医学研究所

收稿日期:2009-10-26 出版日期:2010-04-20 发布日期:2010-04-20
作者简介:姚苹苹（1967-），女，副主任技师，从事汉坦病毒研究。
基金资助:
浙江省医药卫生科学研究基金（2006B020）；国家“863”高技术研究发展计划（2007AA02Z465）

Preliminary evaluation of self?made Hantavirus N protein IgM direct capture ELISA diagnostic kit

YAO Ping-Ping, ZHU Han-Ping, YAO Chen-Hui, XU Fang, MEI Ling-Ling, ZHANG Zheng, ZHU Zhi-Yong, DENG Xiao-Zhao, ZHANG Yun

1 Zhejiang Center for Disease Control and Prevention, Hangzhou 310051, Zhejiang Province, China; 2 Dalian Medical University; 3 The Institute of Military Medicine, Nanjing Command

Received:2009-10-26 Online:2010-04-20 Published:2010-04-20
Supported by:
Supported by the Medical and Health Science Foundation of Zhejiang（No. 2006B020） and National “863” High Technology Research and Development Program of China （No. 2007AA02Z465）

摘要/Abstract

摘要：

目的　初步评价应用自制辣根过氧化物酶（HRP）标记汉坦病毒（HV）重组N蛋白（rNP）的rNP?IgM直接捕捉ELISA 诊断试剂盒。方法　考核该试剂盒的特异性和稳定性；比较其与同类商品试剂盒的临床检测结果，以评估检测血清抗HV?IgM的敏感性。结果　（1）该试剂盒仅与抗HV?IgM 阳性血清发生反应，而与抗水痘病毒-IgM（抗VZV?IgM）、抗流行性乙型脑炎病毒-IgM（抗JEV?IgM）、抗登革热病毒-IgM（抗DV?IgM）、抗手足口EV71病毒-IgM（抗EV71?IgM）阳性血清均无反应；试剂盒放置37 ℃ 3 d，检测血清抗HV?IgM 的活性，无明显降低。（2）在120例临床疑似肾综合征出血热的144份血清中，2种试剂盒仅对12例的12份血清抗HV?IgM检测结果不一致，其中8例的首份血清，该试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（第2份血清2种试剂盒均阳性）；3例的首份血清（未采到第2份血清），该试剂盒为临界值，商品试剂盒阴性；另1例的首份血清该试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（2种试剂盒第2份血清和第3份血清均阳性）。结论　实验室研制的捕获法ELISA抗HV?IgM诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性，适于HV感染的临床诊断和流行病学监测。

关键词: 汉坦病毒, N蛋白, 重组表达, IgM捕捉ELISA

Abstract:

Objective　To provide a preliminary evaluation of the self?made horseradish peroxidase (HRP) marked Hantavirus (HV) recombinant N protein (rNP) rNP?IgM direct capture ELISA diagnostic kit. Methods　Assessment of the specificity and stability of the kit and comparison of clinical results with similar products were performed to evaluate the sensitivity of the kit in the detection of serum anti?HV?IgM. Results　(1) The kit was only responsive to anti?HV?IgM positive serum, and irresponsive to anti?varicella?zoster virus?IgM (anti?VZV?IgM), anti?Japanese encephalitis virus?IgM (anti?JEV?IgM), anti?dengue virus?IgM (anti?DV?IgM), anti?hand, foot and mouth EV71 virus?IgM (anti?EV71?IgM) positive sera. No obvious reduction in serum anti?HV?IgM detecting capability was noticed after placement at 37 ℃ for 3 d. (2) In 144 sera samples in 120 patients with suspected hemorrhagic fever with renal syndrome, inconsistency was observed only in the anti?HV?IgM test results in 12 sera of 12 patients between the two kinds of kits, in which 8 primary sera samples were detected positive by the kit and negative by commercial ones (the secondary sera samples were positive for both kits); 3 primary samples (the secondary samples unavailable) were at the critical value for the kit and negative for commercial kits. Meanwhile, one other primary serum sample was positive for the kit and negative for the commercial ones (the secondary and tertiary ones positive for both). Conclusion　The laboratory developed capture ELISA anti?HV?IgM diagnostic kits had favorable specificity, stability and sensitivity, suitable for the clinical diagnosis and epidemiological surveillance of HV infections.

Key words: Hantavirus, Nucleocapsid protein, Recombinant expression, IgM capture ELISA

中图分类号:

R373.3+2

姚苹苹1，朱函坪1，姚晨辉2，徐芳1，梅玲玲1，张政1，朱智勇1，邓小昭3，张云3. 自制汉坦病毒N蛋白IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒的初步评价[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2010, 21(2): 128-130.

YAO Ping-Ping, ZHU Han-Ping, YAO Chen-Hui, XU Fang, MEI Ling-Ling, ZHANG Zheng, ZHU Zhi-Yong, DENG Xiao-Zhao, ZHANG Yun. Preliminary evaluation of self?made Hantavirus N protein IgM direct capture ELISA diagnostic kit[J]. Chines Journal of Vector Biology and Control, 2010, 21(2): 128-130.

参考文献

［1］ Schmaljohn CS, Hasty SE, Dalrymple JM, et al. Antigenic and genetic properties of viruses linked to hemorrhagic fever with renal syndrome［J］. Science，1985，227（4690）：1041-1044.
［2］ Lundkvist Å, Niklasson B. Hemorrhagic fever with renal syndrome and other hantavirus infections［J］. Rev Med Virol，1994，4：177-184.
［3］ Cosgriff TM. Mechanisms of disease in hantavirus infection: pathophysiology of hemorrhagic fever with renal syndrome［J］. Rev Infect Dis，1991，13（1）：97-107.
［4］ Plyusnin A, Kruger DH, Lundkvist A. Hantavirus infections in Europe［J］. Adv Virus Res，2001，57：105-136.
［5］ Chen HX, Qiu FX, Dong BJ, et al. Epidemiological studies on hemorrhagic fever with renal syndrome in China［J］. J Infect Dis，1986，154（3）：394-398.
［6］ Ahn C, Cho JT, Lee JG, et al. Detection of Hantaan and Seoul viruses by reverse transcriptase?polymerase chain reaction（RT?PCR） and restriction fragment length polymorphism（RFLP） in renal syndrome patients with hemorrhagic fever［J］. Clin Nephrol，2000，53（2）：79-89.
［7］ Garin D, Peyrefitte C, Crance JM, et al. Highly sensitive TaqMan PCR detection of Puumala hantavirus［J］. Microbes Infect，2001，3（9）：739-745.
［8］ Hörling J, Lundkvist Å, Persson K, et al. Detection and subsequent sequencing of Puumala virus from human specimens by polymerase chain reaction［J］. J Clin Microbiol，1995，33（2）：277-282.
［9］ Lee HW, van der Groen G. Hemorrhagic fever with renal syndrome［J］. Prog Med Virol，1989，36：62-102.
［10］ Elliott LH, Schmaljohn CS, Collet MS. Bunyaviridae genome structure and gene expression［J］. Curr Top Microbiol Immunol，1991，169：91-141.
［11］ Zoller LG, Yang S, Gott P, et al. A novel capture enzyme?linked immunosorbent assay based on recombinant proteins for sensitive and specific diagnosis of hemorrhagic fever with renal syndrome［J］. J Clin Microbiol，1993，31（5）：1194-1199.
［12］ Elgh FA, Lundkvist OA, Alexeyev G, et al. A major antigenic domain for the human humoral response to Puumala virus nucleocapsid protein is located at the amino?terminus［J］. J Virol Methods，1996， 59（1-2）：161-172.
［13］ Gott PL, Zoller S, Yang R, et al. Antigenicity of hantavirus nucleocapsid proteins expressed in E. coli［J］. Virus Res，1991，19（1）：1-15.
［14］ Schmaljohn CS, Chu YK, Schmaljohn AL, et al. Antigenic subunits of Hantaan virus expressed by baculovirus and vaccinia virus recombinants［J］. J Virol，1990，64（7）：3162-3170.
［15］ Vapalahti O, Lundkvist A, Kallio?Kokko H, et al. Antigenic properties and diagnostic potential of Puumala virus nucleocapsid protein expressed in insect cells［J］. J Clin Microbiol，1996，34（1）：119-125.
［16］朱智勇，傅桂明，翁景清，等. 自出血热病人分离到一株EHF病毒的特性［J］. 浙江医学，1984，6（6）：1-3.
［17］朱函坪，姚苹苹，徐芳，等. 汉坦病毒N蛋白的重组表达及其用于IgM直接捕捉ELISA的建立和应用［J］. 中华流行病学杂志，2007，28（7）：692-696.

[1]	胡挺松, 胡秋凌, 李绍雄, 黄勇, 胡海梅, 高丽芬, 罗琼梅, 何永芝, 周永存, 张海林, 张富强. 云南省楚雄市2015-2018年肾综合征出血热流行特征及宿主动物调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2020, 31(2): 152-157.
[2]	车雷, 张国斌, 高丹, 赵梁, 王晓丽. 沈阳市鼠携带汉坦病毒G2片段基因分型及序列特征分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2019, 30(1): 91-94.
[3]	刘天, 黄继贵, 郝海波, 李斌, 刘漫, 刘力, 夏世国, 毛安禄. 湖北省荆州市2017年肾综合征出血热流行特征及宿主动物调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2018, 29(6): 609-612.
[4]	尹小平, 宋峰林, 赵姗姗, 田延河, 巴特尔, 程天立, 张江国, 高玉峰. 中国-哈萨克斯坦边境阿拉山口地区小兽携带汉坦病毒调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2018, 29(1): 38-41.
[5]	王妍, 魏亚梅, 韩旭, 韩占英, 蔡亚男, 齐顺祥, 李琦. 河北省肾综合征出血热疫区鼠类构成及其携带汉坦病毒调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(6): 553-556.
[6]	李云, 史玲莉, 刘荐男, 闫冀焕, 聂维忠, 刘淑萍. 秦皇岛口岸褐家鼠携带汉坦病毒S基因序列分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(5): 487-489.
[7]	叶海波, 万道正, 许佳, 云小云, 张晓龙, 覃凤葵, 陈健超, 方勇, 姚李四. 广西地区部分口岸鼠传疾病病原体调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(4): 343-346.
[8]	黄鹏, 杨章女, 刘源, 姚苹苹, 胡建利, 王笑辰, 俞建家, 李军, 韩亚萍, 金柯, 杨龙, 张云, 岳明. 东南沿海地区1980-2015年汉坦病毒分子特征及流行病学分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2017, 28(4): 354-358.
[9]	赵爽, 陈志强, 詹志辉, 叶婷婷, 王秀彦. 南沙口岸鼠形动物汉坦病毒感染状况调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(6): 591-593.
[10]	魏亚梅, 韩占英, 张艳波, 韩旭, 蔡亚男, 许永刚, 齐顺祥, 李琦. 河北省汉坦病毒的分离、复苏及分型[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(5): 447-449.
[11]	郭婷, 张海林, 张云智. 食虫动物相关汉坦病毒的研究进展[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(3): 305-307.
[12]	高云霞, 李小波, 方盛藩, 颜杰, 黄鹂, 张显光, 方树春, 邓荆, 丁国允, 黄吉城. 广东口岸鼠形动物间鼠疫耶尔森菌和汉坦病毒感染状况调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2016, 27(2): 137-140.
[13]	孙炳欣, 孙宇, 沈博, 吴静. 长春市鼠类携带汉坦病毒的基因型分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2015, 26(6): 600-604.
[14]	刘师文, 徐刚, 龚甜, 熊英, 施勇, 李健雄, 刘晓庆, 肖芳, 张艳妮, 周珺. 江西省鼠类携带汉坦病毒基因特征研究[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2015, 26(5): 475-479.
[15]	靳铁治, 吴瑞, 陈海龙, 陈晓宁, 马超锋, 王开锋. 西安市肾综合征出血热宿主动物调查及病原分析[J]. 中国媒介生物学及控制杂志, 2015, 26(4): 379-382.