徐昌平;卢亦愚;严菊英; 冯燕; 高筱萍
XU Chang-ping; LU Yi-yu; YAN Ju-ying; FENG Yan; GAO Xiao-ping
摘要: 目的 建立特异、快速、灵敏的TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应(TaqMan-based Real-time PCR)用于西尼罗病毒(WNV)核酸检测,为WNV的感染诊断和流行病学监测奠定技术基础。方法 根据文献公开发表的WNV核酸检测引物和TaqMan探针,优选最佳引物探针。应用DNAWorks2.4在线软件设计8条寡核苷酸片段,基于PCR合成包含引物探针扩增区域的230个核苷酸作为WNV模拟核酸。并对TaqMan-based Real-time PCR条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度。结果 该方法对WNV核酸检测有高度特异性,与流行性乙型脑炎、登革热1~4型等虫媒病毒均无交叉反应,对构建的DNA检测灵敏度达100拷贝/反应。结论 TaqMan-based Real-time PCR是一种快速检测WNV特异、敏感的方法,适用于WNV的早期感染诊断和流行病学监测。